以細胞融合為基礎的鼠雜交瘤技術的發展，使得人們能夠大量獲取高親和性和強特異性的鼠單克隆抗體(McAb)， McAb 在理論和實踐上的應用成為解決生物學和醫學等許多重大問題的重要手段。但是鼠源性單抗應用于人類的臨 床應用結果反映出了單克隆抗體藥物存在的一些問題 :
鼠源性單抗容易容易產生人抗鼠抗體(HAMA) ,在體內作為異源蛋白被清除掉，從而削弱其治療的有效性。
鼠源性單抗在人體內生物活性降低，其 Fc 段不能有效激活人體 FcRn 及補體系統的效應功能。
鼠源性單抗在人體內的半衰期短，因而降低了其療效。
因此，人們一直致力于人源性抗體的研究，鼠抗體人源化就是通過基因改造，使其和人體內的抗體分子具有極其相 似的輪廓，從而逃避人免疫系統的識別，避免誘導 HAMA（人抗鼠抗體）反應。進行抗體的人源化有兩個基本原 則：保持或提高抗體的親和力和特異性；大大降低或基本消除抗體的免疫原性。人源化有多種方案，都必須遵循這 兩個原則，尤其不能喪失抗體特異結合的能力。
鼠源性單抗
人用鼠源單抗的生產方法一般分為體內法和體外法 2 種。
體內法：體內法即腹水法。盡管腹水中抗體濃度比較高(2-10mg/ml)，但由于所用的 BALB/c 小鼠必須達到 SPF 級， 繁殖、飼養 BALB/c 小鼠及生產腹水、純化抗體的廠房必須符合 GMP 要求，WHO 及我國對體內法生產的人用鼠 源單克隆抗體的質檢項目繁多，要求嚴格，因此限制了體內法在人用鼠源單抗生產領域的應用。
體外法：體外法(雜交瘤細胞體外培養法)的產品純度高，可以避免鼠類病毒的污染，簡化質檢項目，操作具有可控 制性，適用于大規模工業生產，因此是人用鼠源單抗生產方式的主要發展方向。體外法的制備流程也基本相同，即 從超免疫的供體中即抗原免疫的小鼠獲取脾細胞，選育出非分泌免疫球蛋白缺陷型的骨髓瘤細胞，待細胞融合后， 對單個細胞進行克隆，體外培養出能分泌單抗的克隆細胞。
人鼠嵌合性單抗（Chimeric Antibody）
第一代人源化抗體是將鼠 McAb 的可變區和人抗體的恒定區組成嵌合抗體。由于異源 性 Ab 的免疫反應約有 90%是針對恒定區（C 區），要降低 mAb 的抗原性，必須對 Ab 的恒定區進行人源化。構建嵌合抗體的大致原理是，從分泌某 mAb 的雜交瘤細 胞基因組中分離和鑒別出重排的功能性可變區（V 區）基因，經基因重組與 Ig 恒定 區基因相拼接，插入到適宜的表達載體中，構成鼠/人嵌合的輕重鏈基因表達質粒， 經轉染骨髓瘤細胞，通過篩選即可制備出鼠/人嵌合抗體。這種嵌合抗體同鼠源抗體 比較至少有以下兩個優點：
它可以按需要對抗體的效應基因進行選擇或剪切。例如人 Ig 的同種型 IgG1 和 IgG3 對介導補體依賴及細 胞介導的溶解作用具備優勢，因而利用該技術可以拼接不同亞類的人 C 區基因，來改變抗體的效應功能， 使原細胞毒性較低的 IgG2a 和 IgG2b 變成細胞毒性較高的 IgG1 和 IgG3，增強抗體的免疫治療功能，可 用來殺死腫瘤細胞。
在治療中使用人而不是鼠 mAb 的同種型，減小了鼠源 mAb 作為異種蛋白對人體的免疫原性，它通過避免 抗同種型抗體的產生，減少了 HAMA 的生成。例如，當鼠對鼠 Ig 互補決定區（CDR）產生免疫耐受時， 用鼠抗-淋巴細胞 Ab 可以激發抗獨特型反應，但相對那些對可變區不耐受的動物來說，該鼠的抗獨特型反 應被推遲并很微弱。
迄今已研制出很多鼠/人嵌合抗體，有些已陸續進入臨床應用，主要用于惡性腫瘤的診療，它在預防移植排 斥反應也取得了較為滿意的效果，在治療自身免疫疾病以及控制藥物過量、藥物過敏反應中已顯示出巨大 優勢。但是因為有鼠 McAb 可變區的存在，應用時仍會引起較強烈的 HAMA 反應。在此基礎上，進一步 將鼠 McAb 可變區中相對保守的 FR 換成人的 FR，僅僅保留抗原結合部位 CDR(即 CDR 移植)—即把鼠抗體的 CDR 序列移植到人抗體的可變區內，所得到的抗體稱 CDR 移植抗體或改型抗體，也就是真正意義上 的人源化抗體。
CDR 移植單抗（CDR Grafting Monoclonal Antibody）
完全 CDR 移植抗體（改型抗體）
完全 CDR 移植抗體由于鼠源性抗體 VR 中的骨架區仍殘留一定的免疫原性，為最大限度的減少鼠源成分，用人 FR 替代鼠 FR 可形成更為完全的人源化抗體，即在此抗體中除了３個 CDR 是鼠源以外，其余全部是人源結構，這一類 型的抗體稱為 CDR 移植抗體或改型抗體。CDR 移植抗體中非人序列含量低（約 5%），研究已證實其免疫原性大 大減小，并且在人體內的血清半衰期延長。
CDR 移植技術的理論依據是：
CDR 是決定抗原結合位點的唯一結構，因而也是抗體 特異性和親和力的決定部位。
框架區能夠接受外源 CDR 的植入。CDR 移植不僅可 以降低 mAb 的免疫原性，而且還可以把鼠源 mAb 與 Ag 結合的性質授予人抗體。
應用這一策略，將鼠源 McAb 的 CDR 區完全移植，得到了抗磷脂酰肌醇（蛋白）聚糖嵌合抗體。但隨后多 項研究發現，簡單的 CDR 移植往往明顯降低抗原－抗體反應的親和力，甚至喪失與抗原結合的能力。其原 因在于 FR 不僅作為骨架對 CDR 起到支持作用，FR 中的某些非 CDR 區補充調控殘基還為 CDR 的回折構象 提供必要的支持，其形狀和側鏈大小協同決定 CDR 的基本結構，影響 CDR 與抗原結合的特異性和親和力。
部分 CDR 移植抗體
在簡單 CDR 移植的基礎上又相繼發展了部分 CDR 移植技術。研究發現輕鏈的 CDR1、CDR2 和重鏈的 CDR3 對 保證抗體與抗原特異性結合至關重要，其余三個 CDR 的作用則較低。因此只將抗體結合抗原必須的 CDR 移植到人 抗體的 FR 骨架上即能獲得對人免疫原性更小的嵌合抗體，這類抗體稱為部分 CDR 移植抗體。目前，對 CDR 移植 的人源化路線是，在鼠/人嵌合抗體的基礎上，通過數據庫檢索、計算機分子模擬等尋找出有最大同源性的人可變 區模板，綜合考慮表面殘基、與 CDR 有相互作用或對空間結構有重要影響的殘基，確定需要保留和改變的關鍵殘基，再通過模擬基因合成，表達檢測實際效果，進行必要的修正，來獲得高親和力的治療 mAb。目前已構建出多 種針對不同抗原的 CDR 移植抗體，有些已應用于臨床診治，并取得了令人滿意的效果，如消除腫瘤，延長器官移 植生存期，改善類風濕關節炎、全身性脈管炎、感染性疾病及免疫混亂性疾病的臨床癥狀等。
表面重塑抗體
然而，只通過移植 CDR 序列產生的人化抗體與抗原結合的能力遠不及其親代鼠源 Mab。為了恢復其高親和力，必 須對 mAb 進行進一步的分析、設計、改建工作，使其抗原決定環的結構更加完善。Chothia 和 LesK 首先提出一 些框架殘基對 CDR 構象因此的重要性，并綜合地檢測了所有影響抗原結合的框架殘基。Xiang 等發現嵌合抗體 B72.3 的 71 和 93 框架殘基是重鏈超變環構象的主要決定部分。因此，可用親代鼠源抗體的相關序列替代 CDR 移 植抗體 V 區框架區的關鍵殘基，使 CDR 構象得以維持。但這同時又增加了鼠源序列的成分，致使免疫原性也加強。 從治療的角度考慮，最好是能夠找到框架區變化最小而抗原親和力又很高的人化抗體。盡管有分子模擬法的指導， 但要測定哪些框架變化對抗原結合有益，通常需要分析許多不同的抗體突變型。
該策略作為較新的一種人源化途徑,還在逐步成熟階段。鼠源 McAb 在人體引起的 HAMA 反應,究竟是完全由其表 面的暴露殘基引起，還是由表面殘基與內部殘基的共同貢獻，涉及到抗體產生最基本的免疫學機制，而這種機制仍 是目前探討的熱點。盡管有人認為，即使在 MHC 背景下鼠源 McAb 被加工和提呈后包埋殘基暴露出抗原性，但誘 生的抗抗體也只能和降解的或解折疊的原抗體起反應，不會干擾原抗體的治療效應。
全人源化單抗（Fully Human Monoclonal Antibody）
人源化 mAb 基本上解決了鼠抗體的最重要問題——免疫原性，但是人源化過程仍很繁復且費用昂貴，它需要廣泛 的計算機模型設計，即使如此，大量反復試驗仍不可避免，因為要試驗各種氨基酸置換以測定對目標選擇性和結合 親和力的有害作用。而全人源化單克隆抗體是指將人類抗體基因通過轉基因或轉染色體技術，將人類編碼抗體的基 因全部轉移至基因工程改造的抗體基因缺失動物中，使動物表達人類抗體，達到抗體完全人源化的目的。
目前生產完全人源化抗體的方法主要包括抗體庫技術和人源性抗體轉基因小鼠技術兩種。
